Polimeraza e ADN-së së egër Taq
Taq ADN Polimeraza është një polimerazë e ADN-së e qëndrueshme nga Thermus aquaticus YT-1, që ka një aktivitet polimerazë 5'→3' dhe një aktivitet endonukleazë flap 5'.
Komponentët
| Komponenti | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq Buffer | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq ADN Polimeraza (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Gjendja e ruajtjes
Transporti nën 0°C dhe ruhet në -25°C~-15°C.
Përkufizimi i njësisë
Një njësi përcaktohet si sasia e enzimës që përfshin 15 nmol dNTP në materialin e patretshëm në acid në 30 minuta në 75°C.
Kontrolli i cilësisë
1.Analiza e pastërtisë së proteinave (SDS-PAGE):Pastërtia e Taq ADN polimerazës u përcaktua ≥95% nga analiza SDS-PAGE.
2.EndAktiviteti onuclease:Një minimum prej 5 U të Taq ADN polimerazës me 1 μg λDNA për 16 orë në 37 ℃ rezulton në asnjë degradim të dallueshëm siç përcaktohet.
3.Aktiviteti i ekzonukleazës:Një minimum prej 5 U të Taq ADN polimerazës me 1 μg λ-Hind Ⅲ trehet ADN për 16 orë në 37 ℃ rezulton në asnjë degradim të dallueshëm siç përcaktohet.
4.Aktiviteti i Nickase:Një minimum prej 5 U të Taq ADN polimerazës me 1 μg ADN pBR322 për 16 orë në 37°C rezulton në asnjë degradim të dallueshëm siç përcaktohet.
5.Aktiviteti RNase:Një minimum prej 5 U të Taq ADN polimerazës me 1,6 μg MS2 ARN për 16 orë në 37°C rezulton në asnjë degradim të dallueshëm siç përcaktohet.
6.E. coliADN:5 U të Taq ADN polimerazës ekzaminohet për praninë e ADN-së gjenomike të E. coli duke përdorur TaqMan qPCR me primerë specifikë për vendndodhjen e E. coli 16S rRNA.Kontaminimi i ADN-së gjenomike të E. coli është ≤1 kopje.
7.Përforcimi PCR (5,0 kb Lambda ADN)- Një reaksion 50 µL që përmban 5 ng Lambda ADN me 5 njësi Taq DNA Polimerazë për 25 cikle amplifikimi PCR rezulton në produktin e pritur 5,0 kb.
Konfigurimi i reagimit
| Komponentët | Vëllimi |
| ADN-ja e shabllonita | opsionale |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| Primer i kundërt 10 μM | 1 μL |
| Përzierje dNTP (10 mM secila) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μL |
| Taq ADN Polimerazab | 0,25 μL |
| Ujë pa bërthama | Deri në 50 μL |
Shënime:
1) Përqendrimi optimal i reagimit të shablloneve të ndryshëm është i ndryshëm.Tabela e mëposhtme tregon përdorimin e rekomanduar të shabllonit të sistemit të reagimit 50 µL.
| ADN | Shuma |
| Gjenomike | 1 ng-1 μg |
| Plazmide ose virale | 1 fq-1 ng |
2) Përqendrimi optimal i Taq DNA Polimerazës mund të variojë nga 0,25 µL~1 µL në aplikime të specializuara.
ReagimiProgrami
| Hapi | Temperatura(°C) | Koha | Ciklet |
| Denatyrimi fillestara | 95 ℃ | 5 min | - |
| Denatyrimi | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Cikle |
| Pjekjab | 60 ℃ | 15 s | |
| Zgjerim | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Zgjatja përfundimtare | 72 ℃ | 5 min | - |
Shënime:
1) Kushti fillestar i denatyrimit është i përshtatshëm për shumicën e reaksioneve të amplifikimit dhe mund të modifikohet sipas kompleksitetit të strukturës së shabllonit.Nëse struktura e shabllonit është komplekse, koha e para-denatyrimit mund të zgjatet në 5 – 10 minuta për të përmirësuar efektin fillestar të denatyrimit.
2) Temperatura e pjekjes duhet të rregullohet sipas vlerës Tm të abetares, e cila përgjithësisht vendoset në 3~5 ℃ më e ulët se vlera Tm e abetares;Për shabllonet komplekse, është e nevojshme të rregulloni temperaturën e pjekjes dhe të zgjasni kohën e zgjatjes për të arritur amplifikimin efikas.
