Superstart qPCR Premix plus-UNG
Numri i maceve: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG është një reagent i specializuar i krijuar për reaksione cilësore dhe sasiore të PCR në kohë reale duke përdorur zbulimin e bazuar në sondë, i zhvilluar posaçërisht për proceset e liofilizimit.Ai përmban një enzimë të re të ndezjes së nxehtë Hotstart Taq plus (DG), e cila ka aktivitetin e saj të enzimës Taq të mbyllur në temperaturën e dhomës, duke penguar në mënyrë efektive amplifikimin jospecifik të shkaktuar nga pjekja jospecifike e primerit ose formimi i dimerit të primerit në kushte të temperaturës së ulët, duke përmirësuar kështu. specifika e reaksionit të amplifikimit.Ky reagent përdor një tampon specifik qPCR të optimizuar dhe një sistem kundër kontaminimit UNG/dUTP për të arritur fillimin e shpejtë të nxehtë, duke përmirësuar në masë të madhe efikasitetin dhe ndjeshmërinë e reaksioneve qPCR.Mund të marrë kthesa të mira standarde në një gamë të gjerë zonash sasiore dhe të kryejë me saktësi sasinë, duke parandaluar në mënyrë efektive amplifikimin e rremë pozitiv të shkaktuar nga produktet e mbetura PCR ose ndotja e aerosolit.Ky reagent është i pajtueshëm me shumicën e instrumenteve sasiore PCR fluoreshente nga prodhues të tillë si Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad dhe Roche etj., dhe shfaq stabilitet të mirë në formë të liofilizuar.
Përbërja e reagentit
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+falas) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lyoprotektant (opsionale)
Kushtet e ruajtjes
Ruajtja afatgjatë në -20℃;mund të ruhet në 4℃ deri në 3 muaj.Përziejini mirë para përdorimit dheshmangni ngrirjen dhe shkrirjen e përsëritur.
Protokolli i Çiklizmit
| Procedura | Temp. | Koha | Cikli |
| Tretja | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Aktivizimi i polimerazës | 95 ℃ | 1~5 min | 1 |
| Denatyrë | 95 ℃ | 10-20 s | 40-50 |
| Pjekja dhe zgjerimi | 56 ~ 64 ℃ | 20-60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction SyPërgatitja e kërcellit
|
Përbërja |
Vëllimi 25µL |
Vëllimi 50µL |
Përqendrimi përfundimtar |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+falas) (DG) | 5 µL | 10 µL | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45µL | 0,9 µL | 4,5 mm |
| 4 × lioprotektor1 | 6,25 µL | 12,5 μL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2 μL | 1× |
| ADN-ja e shabllonit3 | --- | --- | --- |
| ddH2O | Deri në 25 μL | Deri në 50 μL | --- |
1. Një përqendrim përfundimtar prej 0.2μM për primerët zakonisht jep rezultate të mira;kur performanca e reagimit është e dobët, rregulloni përqendrimin e primerit brenda intervalit 0,2-1μM sipas nevojës.Përqendrimi i sondës zakonisht optimizohet brenda intervalit 0.1-0.3μM përmes eksperimenteve me gradient për të gjetur kombinime optimale.
2. Numri i kopjeve të gjeneve të synuara që përmbahen në lloje të ndryshme shabllonesh ndryshon;nëse është e nevojshme, mund të kryhet hollimi gradient për të përcaktuar sasinë optimale të shtimit të shabllonit.
3. Ky sistem mund të liofilizohet;kur klientët e përdorin këtë sistem pa kërkesa për tharje në ngrirje, mund të shtohet në mënyrë selektive 4×lyoprotecant; nëse kërkohen produkte të thara në ngrirje, gjatë vlerësimit të performancës së produktit në fazën e reagentëve të lëngshëm, ai duhet të shtojë 4×lyoprotecant për të siguruar qëndrueshmëri me komponentët e sistemit të liofilizuar dhe efektet.
Kur sistemi është në përdorimd për tharje me ngrirje, përgatisni sistemi as në vijim:
| Përbërja | 25µL Sistemi i reagimit |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+falas) (DG) | 5 µL |
| 250 mM MgCl2 | 0,45µL |
| 4 × lioprotektor | 6,25 µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | Deri në 18-20 μL |
* Nëse nevojiten sisteme të tjera për tharje me ngrirje, ju lutemi konsultohuni veçmas.
Procedura e liofilizimitss
| Procedura | Temp. | Koha | gjendja | Presioni |
| Ngrirja paraprake | 4 ℃ | 30 min | Mbaje |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Ftohja | ||
| -50 ℃ | 180 min | Mbaje | ||
| Tharja primare | -30 ℃ | 60 min | Ngrohje |
Vakum i fundit |
| -30 ℃ | 70 min | Mbaje | ||
| Tharje dytësore | 25 ℃ | 60 min | Ngrohje |
Vakum i fundit |
| 25 ℃ | 300 min | Mbaje |
2. Procesi i mësipërm i liofilizimit është vetëm për referencë.Lloje të ndryshme produktesh dhe tharëse të ndryshme ngrirëse kanë parametra të ndryshëm, kështu që rregullimet mund të bëhen sipas faktitkushtet gjatë përdorimit.
3. Proceset e ndryshme të liofilizimit mund të jenë të përshtatshme për madhësi të ndryshme të grupeve të liofilizuarprodukte, kështu që duhet të kryhet vërtetim i mjaftueshëm i testimit kur përdoret për prodhim në shkallë të gjerë.
Udhëzime për përdorimin e lyophilized pluhur
1. Centrifugoni shkurtimisht pluhurin e liofilizuar;
2. Shtoni shabllonin e acidit nukleik në pluhurin e liofilizuar dhe shtoni ujë deri në 25µL;
3. Përziejini mirë me centrifugim dhe vendoseni në makinë.
Kontrolli i cilësisë:
1. Testimi funksional: ndjeshmëria, specifika, riprodhueshmëria e qPCR.
2. Nuk ka aktivitet ekzogjen nukleaza, nuk ka kontaminim ekzogjen endo/ekzonukleazë.
Informacion teknik:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG përdor një enzimë të re të ndezjes së nxehtë që mundëson fillimin e shpejtë të nxehtë brenda 1~5 minutash;përmes formulimit special bufer është i përshtatshëm për reaksione sasiore fluoreshente multiplekse PCR.
2. Ka specifikë më të lartë e cila përmirëson ndjeshëm ndjeshmërinë e zbulimit të kufirit sasior të PCR të fluoreshencës, duke bërë që kurbat e amplifikimit të normalizohen, vlera e fluoreshencës të marrë një përmirësim të dukshëm në shabllonet me përqendrim të ulët, të përshtatshëm si reagentët e zbulimit sasior PCR të fluoreshencës me ndjeshmëri të lartë.
3. Për primerët me temperaturë pjekjeje më të ulët ose më të gjatë se 200 bp fragmente, rekomandohet metoda me 3 hapa.
4. Efikasiteti i përdorimit të dUTP dhe ndjeshmëria ndaj enzimës UNG ndryshojnë për gjene të ndryshme të synuara, kështu që nëse përdorimi i sistemit UNG çon në një ulje të ndjeshmërisë së zbulimit, sistemi i reagimit duhet të rregullohet dhe optimizohet.Nëse kërkohet mbështetje teknike, ju lutemi kontaktoni kompaninë tonë.
5. Përdorni zona dhe pipeta të dedikuara para dhe pas amplifikimit, vishni doreza gjatë operimit dhe ndërrojini ato shpesh;mos e hapni tubin e reagimit pas përfundimit të PCR për të minimizuar kontaminimin e mostrave nga produktet PCR.
