Reagenti i lëshimit të mostrës
Reagenti i lëshimit të mostrës është për skenarët e diagnostikimit molekular POCT.Për dy sistemet e amplifikimit të drejtpërdrejtë LAMP dhe PCR të amplifikimit të drejtpërdrejtë, nuk ka nevojë për nxjerrjen e acidit nukleik.Lizati i papërpunuar i kampionit mund të përforcohet drejtpërdrejt, gjeni i synuar mund të zbulohet me saktësi, koha e zbulimit të mostrës mund të shkurtohet më tej, gjë që përputhet në mënyrë të përkryer me kërkesat e aplikimit të POCT molekulare.Ai është i përshtatshëm për tamponët e hundës, tamponëve të fytit dhe llojeve të tjera të mostrave.Mostrat e përpunuara mund të përdoren drejtpërdrejt për zbulimin sasior PCR ose LAMP të fluoreshencës në kohë reale, dhe të njëjtat rezultate si metodat konvencionale të nxjerrjes mund të arrihen pa operacione të komplikuara të nxjerrjes së acidit nukleik.
Kushtet e ruajtjes
Transportoni dhe ruani në temperaturën e dhomës.
Kontrolli i cilësisë
Zbulimi funksional – qPCR sasiore: Sistemi i reagentit të lëshimit të mostrës 800μl u përforcua
me 1000 kopje Novel Pseudovirus, një mostër e shtupës së hundës, që rezulton me kthesa të ngjashme amplifikimi dheVlerat ΔCt brenda ± 0,5 Ct.
Procedura eksperimentaleres
1. Merrni 800 μl Reagent për Lirimin e Kampionit dhe shpërndajeni tretësirën e lizës në tubin e kampionimit 1,5 mL
2. Merrni tamponin e hundës ose tamponit të fytit me tampon; Procedura e marrjes së mostrave të shtupës së hundës: merrni shtupë sterile dhe vendoseni në vrimat e hundës, avanconi ngadalë në rreth 1,5 cm thellësi, rrotullojeni butësisht 4 herë kundër mukozës së hundës për më shumë se 15 sekonda , më pas përsëritni të njëjtin operacion në zgavrën tjetër të hundës me të njëjtin shtupë. Procedura e marrjes së mostrave të shtupës së fytit: merrni shtupë sterile dhe butësisht, shpejt fshijini bajamet e faringut dhe murin e pasmë të faringut 3 herë.
3.Vendoseni tamponin menjëherë në tubin e marrjes së mostrave.Koka e shtupës duhet të rrotullohet dhe të përzihet në solucionin e ruajtjes për të paktën 30 sekonda për të siguruar që kampioni të jetë elutur plotësisht në tubin e marrjes së mostrave.
4. Inkubimi në temperaturën e dhomës (20~25℃) për 1min, përgatitja e tamponit të lizës përfundon.
5. Si sistemi 25μl RT-PCR dhe RT-LAMP ishin të pajtueshëm me sasinë prej 10μl të shtimit të shabllonit për eksperimentet e zbulimit.
Shënime
1. Sasia minimale e lizatit direkt të kampionit që korrespondon me një shtupë të vetme mund të rregullohet në 400μl, e cila mund të rregullohet sipas nevojave të testimit.
2. Pasi kampioni të përpunohet nga reagenti i lëshimit të kampionit, rekomandohet të kryhet faza tjetër e provës sa më shpejt të jetë e mundur, intervali i pritjes preferohet të jetë më pak se 1 orë.
3. PH i lizatit të mostrës është acid, dhe sistemi i zbulimit duhet të ketë një tampon të caktuar.Është i përshtatshëm për shumicën e zbulimit të fluoreshencës PCR, RT-PCR dhe LAMP me tampon pH, por jo i përshtatshëm për zbulimin kolorimetrik LAMP pa bufer.
