Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Blu)

Numri i maceve: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Bazuar në Ngjyrë) është një zgjidhje paraprake për amplifikimin sasior PCR 2× në kohë reale, i karakterizuar nga ndjeshmëri dhe specifikë e lartë, ka ngjyrë blu dhe ka efektin e gjurmimit të shtimit të mostrës.Komponenti kryesor Taq ADN polimeraza përdor fillimin e nxehtë të antitrupave për të penguar në mënyrë efektive amplifikimin jospecifik për shkak të pjekjes së primerit gjatë përgatitjes së mostrës.Në të njëjtën kohë, formula shton faktorët nxitës për të përmirësuar efikasitetin e amplifikimit të reaksionit PCR dhe për të barazuar amplifikimin e gjeneve me përmbajtje të ndryshme GC (30 ~ 70%), në mënyrë që PCR sasiore të mund të marrë një marrëdhënie të mirë lineare në një sasi të gjerë. Rajon.Ky produkt përmban ngjyrë speciale ROX Passive Reference, e cila është e aplikueshme për shumicën e instrumenteve qPCR.Nuk është e nevojshme të rregulloni përqendrimin e ROX në instrumente të ndryshme.Është e nevojshme vetëm të shtohen abetare dhe shabllone për të përgatitur sistemin e reagimit për përforcim.

Komponentët

Universal Blue qPCR Master Mix

Kushtet e ruajtjes

Produkti dërgohet me pako akulli dhe mund të ruhet në -25℃~-15℃ për 18 muaj.Është e nevojshme të shmanget rrezatimi i fortë i dritës gjatë ruajtjes ose përgatitjes së sistemit të reagimit.

Specifikim

Udhëzimet

1.Sistemi i reagimit

[Shënim]: Përziejini tërësisht përpara përdorimit për të shmangur flluska të tepërta nga lëkundjet e forta.

a) Përqendrimi i primerit: Përqendrimi përfundimtar i primerit është 0.2 μmol/L dhe gjithashtu mund të rregullohet ndërmjet 0.1 dhe 1.0 μmol/L sipas rastit.

b) Përqendrimi i shabllonit: Nëse shablloni është solucion stoku i cDNA i paholluar, vëllimi i përdorur nuk duhet të kalojë 1/10 e vëllimit total të reaksionit qPCR.

c) Hollimi i shabllonit: Rekomandohet hollimi i solucionit stoku të cDNA me 5-10 herë.Sasia optimale e shabllonit të shtuar është më e mirë kur vlera Ct e përftuar nga amplifikimi është 20-30 cikle.

d) Sistemi i reagimit: Rekomandohet përdorimi i 20μL ose 50μL për të siguruar efektivitetin dhe përsëritshmërinë e amplifikimit të gjenit të synuar.

e) Përgatitja e sistemit: Ju lutemi përgatituni në stolin super të pastër dhe përdorni majat dhe tubat e reagimit pa mbetje nukleaze;rekomandohet përdorimi i majave me fishekë filtri.Shmangni kontaminimin e kryqëzuar dhe kontaminimin me aerosol.

2.Programi i reagimit

Programi standard

Program i shpejtë

[Shënim]: Programi i shpejtë është i përshtatshëm për shumicën dërrmuese të gjeneve dhe programet standarde mund të provohen për gjenet individuale komplekse të strukturës sekondare.

a) Temperatura dhe koha e pjekjes: Ju lutemi rregulloni sipas gjatësisë së primerit dhe gjenit të synuar.

b) Marrja e sinjalit të fluoreshencës (★): Ju lutemi vendosni procedurën eksperimentale sipas kërkesave në udhëzimet për përdorimin e instrumentit.

c) Kurba e shkrirjes: Programi i paracaktuar i instrumentit mund të përdoret normalisht.

3. Analiza e rezultateve 

Për eksperimentet sasiore kërkoheshin një minimum prej tre përsëritjesh biologjike.Pas reagimit, lakorja e amplifikimit dhe kurba e shkrirjes duhet të konfirmohen.

3.1 Kurba e përforcimit:

Kurba standarde e amplifikimit është në formë S.Analiza sasiore është më e sakta kur vlera e Ct bie midis 20 dhe 30. Nëse vlera e Ct është më e vogël se 10, është e nevojshme të hollohet shablloni dhe të kryhet përsëri testi.Kur vlera e Ct është midis 30-35, është e nevojshme të rritet përqendrimi i shabllonit ose vëllimi i sistemit të reagimit, në mënyrë që të përmirësohet efikasiteti i amplifikimit dhe të sigurohet saktësia e analizës së rezultatit.Kur vlera e Ct është më e madhe se 35, rezultatet e testit nuk mund të analizojnë në mënyrë sasiore shprehjen e gjenit, por mund të përdoren për analiza cilësore.

3.2 Kurba e shkrirjes:

Pika e vetme e lakores së shkrirjes tregon se specifika e reagimit është e mirë dhe mund të kryhet analiza sasiore;nëse kurba e shkrirjes tregon maja të dyfishta ose të shumëfishta, analiza sasiore nuk mund të kryhet.Kurba e shkrirjes tregon maja të dyfishta, dhe është e nevojshme të gjykohet nëse kulmi jo i synuar është dimer primer ose amplifikim jo specifik me elektroforezë me xhel agaroze të ADN-së.Nëse është një dimer primer, rekomandohet të zvogëlohet përqendrimi i primerit ose të ridizajnohen primerët me efikasitet të lartë amplifikimi.Nëse është përforcim jospecifik, ju lutemi rrisni temperaturën e pjekjes ose ridizajnoni primerët me specifikë.

Shënime

Ju lutemi vishni PPE-të e nevojshme, të tilla pallto laboratori dhe doreza, për të garantuar shëndetin dhe sigurinë tuaj!

Ky produkt është VETËM për përdorim kërkimor!