Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Numri i maceve: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) është një komplet PCR sasior multipleks i bazuar në ARN si shabllon.Në procesin e eksperimentit, në të njëjtin tub u krye transkriptimi i kundërt dhe PCR sasiore, gjë që thjeshtoi operacionin eksperimental dhe uli rrezikun e kontaminimit.Në këtë komplet, cDNA e vargut të parë u sintetizua në mënyrë efikase nga Reverse Transcriptase rezistente ndaj nxehtësisë dhe u përforcua në mënyrë sasiore nga HotStart Tag DNA Polymerase.Kompleti përmban kryesisht bufer MP të optimizuar, përzierje enzimash, etj. Zgjidhja buferike tashmë përmban Mg2+dhe dNTP.Përveç kësaj, shtohen faktorët që mund të pengojnë në mënyrë efektive amplifikimin PCR jo-specifik dhe të përmirësojnë efikasitetin e amplifikimit të reaksioneve të shumta qPCR, të cilat mund të sigurojnë efikasitetin e amplifikimit dhe të kryejnë deri në reaksionin e amplifikimit të shumëfishtë.Sistemi dUTP/UDG u shtua për të parandaluar në mënyrë efektive rrezikun e kontaminimit të aerosolit.
Komponentët
1. Tampon
2. Përzierje enzimash
Specifikim
| Fillimi i nxehtë | Nisja e nxehtë e integruar |
| Metoda e zbulimit | Zbulimi i sondës së primerit |
| Metoda PCR | Një hap RT-qPCR |
| Polimeraza | Taq ADN polimeraza |
| Lloji i mostrës | ADN |
Kushtet e ruajtjes
Produkti dërgohet me akull të thatë dhe mund të ruhet në -25~-15℃ për 1 vit.Duhet të shmanget shpeshtangrirje-shkrirje.Rekomandohet të ruani veçmas.
Udhëzimet
1.Reagimi Sistemi
| Komponentët | Vëllimi (μL) | Përqendrimi përfundimtar |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Përzierje enzimash | 1 | - |
| Përzierja e primerit/sondës (2,5 μM) | 3 | 0.3μM |
| ARN shabllon | 1-10 | - |
| RNase Pa H2O | deri në 25 | - |
Shënime:
Sigurohuni që të përzieni mirë përpara përdorimit, shmangni flluskat e tepërta të shkaktuara nga dridhjet e dhunshme.
a.Përqendrimi i primerit: Përzierja e primerit duke përfshirë primerin multipleks, në varësi të situatës, përqendrimi optimal i primerit mund të jetë midis 0.l dhe 1.0μM.
b.Përqendrimi i sondës: Përzierja e sondës duke përfshirë grupin fluoreshent të diferencës së etiketimit të sondës multiplekse, në varësi të situatës, përqendrimi optimal i sondës mund të jetë midis 0,05 dhe 0,5 μM.
c.Hollimi i shabllonit: qPCR është shumë i ndjeshëm dhe rekomandohet hollimi i shabllonit.Vlera e kontrollit Ct është e përshtatshme midis 20 dhe 35.
d.Përgatitja e sistemit: Ju lutemi përgatiteni në tavolinën e punës ultra të pastër, dhe pipetuesin dhe tubin e reagimit pa mbetje nukleaze;rekomandohet përdorimi i kokës së armës me element filtri.Shmangni kontaminimin e kryqëzuar dhe kontaminimin me aerosol.
2. Çiklizëm i optimizuarProtokolli
| Cikli hap | Temp. | Koha | Ciklet |
| Transkriptimi i kundërt | 50 ℃a | 20 min | 1 |
| Fillestar-denatyrim | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Reaksioni i përforcimit | 95 ℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sek c |
Shënime:
a.Transkriptimi i kundërt: Temperatura mund të zgjedhë 42°C ose 50°C.
b.Reaksioni i amplifikimit: Temperatura rregullohet sipas vlerës Tm të primerëve të projektuar.
c.Marrja e sinjalit të fluoreshencës: Ju lutemi vendosni procedurën eksperimentale sipas kërkesave të manualit të instrumentit.
Shënime
Ju lutemi vishni PPE-të e nevojshme, si pallto laboratori dhe doreza, për të garantuar shëndetin dhe sigurinë tuaj.
