Rnase A
Ribonukleaza A(RNaseA) është një polipeptid me një fije floku që përmban 4 lidhje disulfide me një peshë molekulare prej rreth 13.7 kDa.RNaza Është një endoribonukleazë që degradon në mënyrë specifike ARN me një fije floku në mbetjet C dhe U.Në mënyrë të veçantë, ndarja njeh lidhjen fosfodiesterike të formuar nga 5'-riboza e një nukleotidi dhe grupi fosfat në 3'-ribozën e nukleotidit të pirimidinës ngjitur, në mënyrë që fosfatet 2,3'-ciklike të hidrolizohen në 3 korrespondues. 'fosfatet nukleozide (p.sh., pG-pG-pC-pA-pG shkëputet nga RNaza A për të gjeneruar pG-pG-pCp dhe A-PG).RNaza A është më aktive në ndarjen e ARN-së me një zinxhir.Përqendrimi i rekomanduar i punës është 1-100 μ G/mL, i pajtueshëm me sisteme të ndryshme reagimi.Përqendrimi i ulët i kripës (0-100 mM NaCl) mund të përdoret për prerjen e zinxhirëve të ARN-së me një zinxhir, ARN-së dyvargëshe dhe ARN-së të formuar nga hibridizimi ARN-ADN.
Megjithatë, në përqendrim të lartë të kripës (≥0.3 M), RNaza A vetëm në mënyrë specifike çan ARN-në me një fije floku.
RNaza A përdoret më së shpeshti për të hequr ARN-në gjatë përgatitjes së ADN-së plazmide ose ADN-së gjenomike.Nëse DNase është apo jo aktive gjatë procesit të përgatitjes, mund të ndikojë lehtësisht në reagim.Metoda tradicionale e zierjes në një banjë uji mund të përdoret për të çaktivizuar aktivitetin e DNase.Ky produkt nuk përmban DNase dhe proteazë dhe nuk kërkon trajtim termik përpara përdorimit.Për më tepër, ky produkt mund të përdoret gjithashtu në eksperimentet e biologjisë molekulare si analiza e mbrojtjes së RNase dhe analiza e sekuencës së ARN-së.
Kushtet e ruajtjes
Produkti duhet të ruhet në -25℃~-15℃ për 2 vjet.
Specifikimet
| Pamja e jashtme | Pluhur |
| sasi | 100 mg / 1 g |
| Tipi i produktit | RNaza A |
Udhëzimet
Kjo është një nga metodat e zakonshme për përgatitjen e zgjidhjes së ruajtjes RNase A.Mund të përgatitet edheme metoda të tjera sipas metodave tradicionale në literaturën laboratorike ose referuese (si p.shtretet drejtpërdrejt në 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 ose tretësirë Tris-NaCl)
1. Përdorni 10 mM acetat natriumi (pH 5.2) për të përgatitur 10 mg/mL tretësirë ruajtëse RNase A.
2. Ngrohje në 100 ℃ për 15 min.
3. Ftoheni në temperaturën e dhomës, shtoni 1/10 vëllim të 1 M Tris-HCl (pH 7,4), rregulloni pH në 7,4 (përpër shembull, shtoni 500 mL tretësirë ruajtëse të RNase 10 mg/mL 1 M Tris-HCl, pH 7.4).
4. Nën-paketuar në -20℃ për ruajtje të ngrirë, e cila mund të jetë e qëndrueshme deri në 2 vjet.
[Shënime]:
Kur zihet tretësira RNaseA në kushte neutrale, do të formohet reshje RNase;Ziejeni në një pH më të ulët dhe nëse ka reshje, mund të vërehet, që mund të shkaktohet nga prania e papastërtive të proteinave.Nëse sedimenti gjendet pas zierjes, papastërtitë mund të hiqen me centrifugim me shpejtësi të lartë (13000 rpm), dhe më pas të nën-paketohen për ruajtje në ngrirje.
Shënime
Ju lutemi vishni PPE-të e nevojshme, të tilla pallto laboratori dhe doreza, për të garantuar shëndetin dhe sigurinë tuaj.
