DNase I (Rnase Pa) (5u/ul)
Numri i maceve: HC4007A
DNaza I (Deoksiribonukleaza I) është një endodeoksiribonukleazë që mund të tretet ADN-ja me një ose dy fije floku.Ai njeh dhe këput lidhjet fosfodiesterike për të prodhuar monodeoksinukleotide ose oligodeoksinukleotide të vetme ose të dyfishta me grupe fosfate në terminalin 5' dhe hidroksil në terminalin 3'.Aktiviteti i DNase I varet nga Ca2+dhe mund të aktivizohet nga jonet metalike dyvalente si Mn2+dhe Zn2+.5 mM Ca2+mbron enzimën nga hidroliza.Në prani të Mg2+, enzima mund të njohë rastësisht dhe të çajë çdo vend në çdo varg të ADN-së.Në prani të Mn2+, vargjet e dyfishta të ADN-së mund të njihen njëkohësisht dhe të ndahen pothuajse në të njëjtin vend për të formuar fragmente të ADN-së me fund të sheshtë ose fragmente të ADN-së fundore ngjitëse me 1-2 nukleotide të dala.
Komponentët
| Emri | 0.1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, pa RNase | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Kushtet e ruajtjes
-25℃~-15℃ për ruajtje;Transporti nën pako akulli.
Udhëzimet
1. Përgatitni tretësirën e reaksionit në tubin pa RNase sipas përmasave të renditura më poshtë:
| Komponenti | Vëllimi |
| ARN | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, pa RNase (5U/μL) | 1 U për μg ARN① |
| ddH2O | Deri në 10 μL |
Shënim: ① Llogaritni vëllimin e DNazës I që duhet të shtohet bazuar në sasinë e ARN-së.
2. 37 ℃ për 15 minuta;
3. Shtoni 0.5M EDTA në përqendrimin përfundimtar prej 2.5mM~5mM dhe ngroheni në 65℃ për 10 minuta për të ndaluar reagimin.Mostra mund të përdoret drejtpërdrejt për reaksionin tjetër, siç është transkriptimi i kundërteksperiment.
Përkufizimi i njësisë
Një njësi përcaktohet si sasia e enzimës që do të degradojë plotësisht 1 μg të pBR322ADN në 10 minuta në 37℃.
Kontrolli i cilësisë
RNase:5U DNase I me 1.6μg MS2 ARN për 4 orë në 37℃ nuk jep degradim pasipërcaktohet me elektroforezë me xhel agarozë.
Shënime
1. Ju lutemi përgatisni vetë 0.5MEDTA.
2. Përdorni 1U DNase I për μg ARN.Megjithatë, nëse ARN është më pak se 1 μg, ju lutemi përdorni 1U DNase I.
3. Ju lutemi vendoseni enzimën në akull gjatë operimit.
