Bst 2.0 ADN Polimerazë (pa glicerinë)
Bst ADN polimeraza V2 rrjedh nga Bacillus stearothermophilus ADN Polimeraza I, e cila ka aktivitet 5'→3' ADN polimerazë dhe aktivitet të fortë zëvendësues të zinxhirit, por jo 5'→3' aktivitet ekzonukleazë.Bst ADN Polimeraza V2 është ideale për zhvendosjen e vargut, LAMP për amplifikimin izotermik (amplifikimi izotermik i ndërmjetësuar me lak) dhe renditjen e shpejtë.
Komponentët
| Komponenti | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimeraza V2 (pa glicerol) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| Bufer 10×HC Bst V2 | 1.5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mm) | 1.5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Aplikacionet
1.Amplifikimi izotermik LAMP
2.Reaksioni i zhvendosjes së një vargu të ADN-së
3.Sekuenca e gjenit GC të lartë
4.Sekuenca e ADN-së e nivelit të nanogramit.
Gjendja e ruajtjes
Transporti nën 0°C dhe ruhet në -25°C~-15°C.
Përkufizimi i njësisë
Një njësi përcaktohet si sasia e enzimës që përfshin 25 nmol dNTP në materialin e patretshëm në acid në 30 minuta në 65°C.
Kontrolli i cilësisë
1.Analiza e pastërtisë së proteinave (SDS-PAGE):Pastërtia e Bst ADN polimerazës V2 është ≥99% e përcaktuar nga analiza SDS-PAGE duke përdorur zbulimin Coomassie Blue.
2.Aktiviteti i ekzonukleazës:Inkubimi i një reaksioni 50 μL që përmban një minimum prej 8 U Bst ADN polimerazë V2 me 1 μg ADN të tretur λ-Hind Ⅲ për 16 orë në 37 ℃ nuk rezulton në një degradim të dallueshëm siç përcaktohet.
3.Aktiviteti i Nickase:Inkubimi i një reaksioni 50 μL që përmban një minimum prej 8 U Bst ADN polimerazë V2 me 1 μg ADN pBR322 për 16 orë në 37°C rezulton në një degradim të dallueshëm siç përcaktohet.
4.Aktiviteti RNase:Inkubimi i një reaksioni 50 μL që përmban një minimum prej 8 U të Bst ADN polimerazës V2 me 1.6 μg MS2 ARN për 16 orë në 37°C rezulton në një degradim të dallueshëm siç përcaktohet.
5.E. coli ADN:120 U të Bst ADN polimerazës V2 ekzaminohet për praninë e ADN-së gjenomike të E. coli duke përdorur TaqMan qPCR me primerë specifikë për vendndodhjen e E. coli 16S rRNA.Kontaminimi i ADN-së gjenomike të E. coli është ≤1 kopje.
Reagimi LAMP
| Komponentët | 25μL |
| Bufer 10×HC Bst V2 | 2.5 μL |
| MgSO4 (100 mm) | 1.5 μL |
| dNTP (10 mM secila) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 Jeshile (25×)a | 1.0 μL |
| Përzierja e primeritb | 6 μL |
| Bst ADN Polimeraza V2 (pa glicerinë) (8 U/uL) | 1 μL |
| shabllon | × μL |
| ddH2O | Deri në 25 μL |
Shënime:
1) a.SYTOTM 16 E gjelbër (25×): Sipas nevojave eksperimentale, ngjyra të tjera mund të përdoren si zëvendësues;
2) b.Përzierja e primerit: përftohet duke përzier 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB dhe vëllime të tjera.
Reagimi dhe gjendja
Bufer 1 × HC Bst V2, temperatura e inkubacionit është midis 60°C dhe 65°C.
Inaktivizimi i nxehtësisë
80 °C, 20 minuta
