Frenues Rnase (pa glicerinë)
Frenuesi i RNazës së Murinës është një frenues i RNazës së murit rekombinant i shprehur dhe i pastruar nga E.coli.Ai lidhet me RNazën A, B ose C në një raport 1:1 nëpërmjet lidhjes jokovalente, duke penguar kështu aktivitetin e tre enzimave dhe duke mbrojtur ARN-në nga degradimi.Megjithatë, nuk është efektiv kundër RNase 1, RNase T1, S1 nukleazës, RNase H ose RNase nga Aspergillus.Frenuesi i RNazës së murit u testua me RT-PCR, RT-qPCR dhe mRNA IVT dhe ishte i pajtueshëm me transkriptazat e kundërta të ndryshme komerciale, ADN polimerazat dhe ARN polimerazat.
Krahasuar me frenuesit njerëzorë të RNazës, frenuesi i RNazës së miut nuk përmban dy cisteina që janë shumë të ndjeshme ndaj oksidimit që shkakton inaktivizimin e frenuesit.Kjo e bën atë të qëndrueshëm në përqendrime të ulëta të DTT (më pak se 1 mM).Kjo veçori e bën atë të përshtatshëm për përdorim në reaksione ku përqendrimet e larta të DTT janë të pafavorshme ndaj reaksionit (p.sh. RT-PCR në kohë reale).
Aaplikimi
Ky produkt mund të përdoret gjerësisht në çdo eksperiment ku ndërhyrja e RNase është e mundur për të shmangur degradimin e ARN-së, si p.sh.
1.Sinteza e cADN-së me vargun e parë, RT-PCR, RT-qPCR, etj.;
2. Mbrojtja e ARN-së nga degradimi në transkriptimin/përkthimin in-vitro (p.sh. replikimi viral in vitro);
3.Inhibimi i aktivitetit të RNazës gjatë izolimit dhe pastrimit të ARN.
Kushtet e ruajtjes
Ruani në -25-15℃;
Ciklet ngrirje-shkrirje ≤ 5 herë;
E vlefshme për 1 vit.
Përkufizimi i njësisë
Një njësi përcaktohet si sasia e frenuesit RNase që kërkohet për të frenuar aktivitetin e 5 ng të RNazës A me 50%.
Peshë molekulare
Inhibitori i RNase (pa glicerol) është një proteinë 50 kDa.
Kontrolli i cilësisë
Eksonukleaza Aktiviteti:
Inkubimi i 40 U të enzimës me 1 μg ADN të tretur λ-Hind III për 16 orë në 37°C rezultoi në asnjë degradim të dallueshëm të ADN-së siç përcaktohet nga elektroforeza me xhel.
Aktiviteti i endonukleazës:
Inkubimi i 40 U enzimë me 1 μg λ ADN për 16 orë në 37°C rezultoi në asnjë degradim të dallueshëm të ADN-së siç përcaktohet me elektroforezë xhel.
Nicking Aktiviteti:
Inkubimi i 40 U enzimë me 1 μg pBR322 për 16 orë në 37 ℃ rezultoi në asnjë degradim të dallueshëm të ADN-së siç përcaktohet nga elektroforeza e xhelit.
RNase Aktiviteti:
Inkubimi i 40 U enzimë me 1.6 μg MS2 ARN për 4 orë në 37℃ rezultoi në asnjë degradim të dallueshëm të ARN-së siç përcaktohet nga elektroforeza e xhelit.
E.coli ADN:
40 U enzimë zbulohet nga TaqMan qPCR.ADN-ja e E.coli është ≤ 0. 1pg/40U.
Notes
1. Mos e tundni ose përzieni me forcë për të parandaluar inaktivizimin e enzimës.
Frenuesi 2.RNase është aktiv në temperaturat që variojnë nga 25℃ deri në 55℃ dhe është i çaktivizuar në ≥65℃.
3. Aktiviteti i RNazës H, RNazës 1 dhe RNazës T1 nuk frenohet.
4. Gama e pH për frenimin e aktivitetit të RNase është e gjerë (aktiv në pH 5-9), duke shfaqur aktivitet maksimal në pH 7-8.
