Kompleti i nxjerrjes së ADN/ARN-së virale
Ky komplet është i përshtatshëm për nxjerrjen e shpejtë të ADN/ARN-së virale me pastërti të lartë nga mostra të tilla si tamponët nazofaringeal, tamponët mjedisorë, supernatantët e kulturës qelizore dhe supernatantët homogjenë të indeve.Kompleti bazohet në teknologjinë e pastrimit të membranës silicë që eliminon nevojën për përdorimin e tretësve organikë të fenolit/kloroformit ose precipitimit të alkoolit që konsumon kohë për të nxjerrë ADN/ARN virale të cilësisë së lartë.Acidet nukleike të përftuara janë pa papastërti dhe janë të gatshme për përdorim në eksperimentet e rrjedhës së poshtme, si transkriptimi i kundërt, PCR, RT-PCR, PCR në kohë reale, sekuenca e gjeneratës së ardhshme (NGS) dhe Northern blot.
Kushtet e ruajtjes
Ruani në 15 ~ 25 ℃ dhe transportojeni në temperaturën e dhomës
Komponentët
| Komponentët | 100 RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| ddH2 O pa RNazë | 6 ml |
| Kolonat FastPure ARN | 100 |
| Tubat e koleksionit (2 ml) | 100 |
| Tuba koleksioni pa RNase (1 .5 ml) | 100 |
Buffer VL:Siguroni një mjedis për lizë dhe lidhje.
Buffer RW:Hiqni proteinat e mbetura dhe papastërtitë e tjera.
ddH2O pa RNase:Elutoni ADN/ARN-në nga membrana në kolonën spin.
Kolonat FastPure ARN:Në mënyrë specifike adsorboni ADN/ARN.
Tubat e koleksionit 2 ml:Mblidhni filtratin.
Tuba të koleksionit pa RNase 1,5 ml:Mblidhni ADN/ARN.
Aplikacionet
Tamponët nazofaringeal, tamponët mjedisorë, supernatantët e kulturës qelizore dhe supernatantët homogjenë të indeve.
Mater vetë-përgatiturals
Maja për pipetën pa RNase, tuba centrifuge pa RNase 1,5 ml, centrifugë, mikser vorteksi dhe pipeta.
Procesi i eksperimentit
Kryeni të gjitha hapat e mëposhtëm në një kabinet biosigurie.
1. Shtoni 200 μl të kampionit në një tub centrifuge pa RNase (përgatiteni me PBS ose 0,9% NaCl në rast të mostrës së pamjaftueshme), shtoni 500 μl Buffer VL, përzieni mirë duke e rrotulluar për 15 – 30 sek dhe centrifugoni shkurtimisht për të mbledhur përzierjen në fund të tubit.
2. Vendosni kolonat FastPure ARN në një Tuba Koleksioni 2 ml.Transferoni përzierjen nga Hapi 1 në Kolonat e ARN-së FastPure, centrifugoni në 12,000 rpm (13,400 × g) për 1 min dhe hidhni filtratin.
3. Shtoni 600 μl Buffer RW në Kolonat FastPure ARN, centrifugoni në 12,000 rpm (13,400 × g) për 30 sek dhe hidhni filtratin.
4. Përsëriteni hapin 3.
5. Centrifugoni kolonën e zbrazët me 12,000 rpm (13,400 × g) për 2 min.
6. Transferoni me kujdes kolonat FastPure ARN në një tub të ri koleksioni pa RNase 1,5 ml (të dhëna në komplet) dhe shtoni 30 – 50 μl ddH2O pa RNase në qendër të membranës pa prekur kolonën.Lëreni të qëndrojë në temperaturën e dhomës për 1 min dhe centrifugoni në 12,000 rpm (13,400 × g) për 1 min.
7. Hidhni kolonat FastPure ARN.ADN/ARN mund të përdoret drejtpërdrejt për analizat e mëvonshme, ose të ruhet në -30~ -15°C për një periudhë të shkurtër ose -85~-65°C për një periudhë më të gjatë.
Shënime
Vetëm për përdorim kërkimor.Jo për përdorim në procedurat diagnostike.
1. Paraprakisht ekuilibroni mostrat në temperaturën e dhomës.
2. Viruset janë shumë infektive.Sigurohuni që të merren të gjitha masat e nevojshme të sigurisë përpara eksperimentit.
3. Shmangni ngrirjen dhe shkrirjen e përsëritur të kampionit, pasi kjo mund të çojë në degradim ose reduktim të rendimentit të ADN/ARN-së virale të ekstraktuar.
4. Pajisjet e përgatitura vetë përfshijnë majat e pipetës pa RNase, tuba centrifuge pa RNase 1,5 ml, centrifugë, mikser vorteksi dhe pipeta.
5. Kur përdorni kompletin, vishni një pallto laboratori, doreza lateksi njëpërdorimshme dhe një maskë njëpërdorimshme dhe përdorni materiale harxhuese pa RNase për të minimizuar rrezikun e ndotjes me RNase.
6. Kryeni të gjitha hapat në temperaturën e dhomës nëse nuk specifikohet ndryshe.
Mekanizmi & Rrjedha e Punës
