Enzimat UDG/UNG
UDG (uracil ADN glikozilaza) mund të katalizojë hidrolizën e lidhjes N-glikozidike midis bazës së uracilit dhe shtyllës kurrizore të sheqer-fosfatit në ssDNA dhe dsDNA.Mund të kontrollojë lehtësisht ndotjen e aerosolit dhe është i përshtatshëm për sistemet e zakonshme të biologjisë molekulare si PCR, qPCR, RT-qPCR dhe LAMP.
Specifikimet
| Pritësi i shprehjes | E. coli rekombinante me gjenin e ADN-së të glikozilazës uracil |
| Peshë molekulare | 24. 8 kDa |
| Pastërti | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Inaktivizimi i nxehtësisë | 95℃, 5~10 min |
| Përkufizimi i njësisë | Një njësi (U) përcaktohet si sasia e enzimës që kërkohet për të katalizuar hidrolizën e dsDNA që përmban l μg dU në 30 minuta në 25℃. |
Magazinimi
Produkti duhet të ruhet në -25℃~-15°C për dy vjet.
Udhëzimet
1.Përgatitja e përzierjes së reaksionit PCR sipas sistemit të mëposhtëm
| Komponentët | Vëllimi (μL) | Përqendrimi përfundimtar |
| 10×PCR Bufer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol/Leach |
| ADN-ja e shabllonit | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq ADN Polimeraza (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil ADN Glikozilaza (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH2O | Deri në 50 | - |
Shënim: Sipas kërkesave eksperimentale, përqendrimi përfundimtar i dUTP mund të rregullohet midis 0,2-0,6 mmol/L dhe 0,2 mmol/L dTTP mund të shtohet në mënyrë selektive.
2.Procedura e amplifikimit
| Hapi i ciklit | Temperatura | Koha | Ciklet |
| Degradimi i shabllonit që përmban dU | 25 ℃ | 10 min | 1 |
| Aktivizimi UDG, denatyrimi fillestar i shabllonit | 95 ℃ | 5 ~ 10 minuta | 1 |
| Denatyrimi | 95 ℃ | 10 sek |
30-35 |
| Pjekja | 60 ℃ | 20 sek | |
| Zgjerim | 72 ℃ | 30 sek/kb | |
| Zgjatja përfundimtare | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Shënim: Koha e reagimit në 25°C mund të rregullohet brenda 5-10 minutave sipas kërkesave eksperimentale.
Shënime
1.UDG është aktiv në shumicën e buferëve të reagimit PCR.
2.Enzimat duhet të ruhen në një kuti akulli ose në një banjë akulli kur përdoren dhe duhet të ruhen në -20°C menjëherë pas përdorimit.
3.Ju lutemi vishni PPE-të e nevojshme, të tilla pallto laboratori dhe doreza, për të garantuar shëndetin dhe sigurinë tuaj!
