Rnase A
Ribonukleaza A (RNaseA) është një polipeptid me një fije floku që përmban 4 lidhje disulfide me një peshë molekulare prej rreth 13.7 kDa.RNaza A është një endoribonukleazë që degradon në mënyrë specifike ARN-në me një zinxhir në mbetjet C dhe U.Në mënyrë të veçantë, ndarja njeh lidhjen fosfodiesterike të formuar nga 5'-riboza e një nukleotidi dhe grupi fosfat në 3'-ribozën e nukleotidit të pirimidinës ngjitur, në mënyrë që fosfatet 2, 3'-ciklike të hidrolizohen në33 përkatëse. 'fosfatet nukleozide (p.sh. pG-pG-pC-pA-pG shkëputet nga RNaza A për të gjeneruar pG-pG-pCp dhe A-PG).RNaza A është më aktive në ndarjen e ARN-së me një zinxhir.Përqendrimi i rekomanduar i punës është 1-100μG/mL, i pajtueshëm me sisteme të ndryshme reagimi.Përqendrimi i ulët i kripës (0-100 mM NaCl) mund të përdoret për prerjen e zinxhirëve të ARN-së me një zinxhir, ARN-së dyvargëshe dhe ARN-së të formuar nga hibridizimi ARN-ADN.Megjithatë, në përqendrim të lartë të kripës (≥0.3 M), RNaza A vetëm çan në mënyrë specifike ARN me një fije floku.
RNaza A përdoret më së shpeshti për të hequr ARN-në gjatë përgatitjes së ADN-së plazmide ose ADN-së gjenomike. Pavarësisht nëse DNaza është aktive gjatë procesit të përgatitjes mund të ndikojë lehtësisht në reaksion.Metoda tradicionale e zierjes në një banjë uji mund të përdoret për të çaktivizuar aktivitetin e DNase.Ky produkt nuk përmban DNase dhe proteazë dhe nuk kërkon trajtim termik përpara përdorimit.Përveç kësaj, ky produkt mund të përdoret gjithashtu në eksperimentet e biologjisë molekulare si analiza e mbrojtjes së RNase dhe analiza e sekuencës së ARN-së.
Kushtet e ruajtjes
Produkti mund të ruhet në -25-15℃, i vlefshëm për 2 vjet.
Udhëzimet
Kjo është një nga metodat e zakonshme për përgatitjen e zgjidhjes së ruajtjes RNase A.Mund të përgatitet edhe ngametoda të tjera sipas metodave tradicionale në literaturën laboratorike ose referuese (si p.shtretet drejtpërdrejt në 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 ose tretësirë Tris-NaCl)
1. Përdorni 10 mM acetat natriumi (pH 5.2) për të përgatitur 10 mg/mL tretësirë ruajtëse të RNase A
2. Ngrohje në 100 ℃ për 15 min
3. Ftoheni në temperaturën e dhomës, shtoni 1/10 vëllim të 1 M Tris-HCl (pH 7,4), rregulloni pH në 7,4 (përpër shembull, shtoni 500 ml tretësirë ruajtëse 10g/ml RNase 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Nën-paketuar në -20℃ për ruajtje të ngrirë, e cila mund të jetë e qëndrueshme deri në 2 vjet.
[Shënime]: Kur zihet tretësira RNaseA në kushte neutrale, do të formohet reshje RNase;Ziejeni në një pH më të ulët dhe nëse ka reshje, mund të vërehet, që mund të shkaktohet nga prania e papastërtive të proteinave.Nëse sedimenti gjendet pas zierjes, papastërtitë mund të hiqen me centrifugim me shpejtësi të lartë (13000 rpm), dhe më pas të nën-paketohen për ruajtje në ngrirje.
Informacioni i produktit
| Sinonime | Ribonukleaza I;Ribonukleaza e pankreasit;Ribonukleaza 3'-pirimidnooligonukleotidohidrolaza;Rnase A;Endoribonulceaza I |
| CAS Nr. | 9001-99-4 |
| Pamja e jashtme | Pluhur i bardhë i liofilizuar |
| Peshë molekulare | ~ 13.7 kDa (sekuenca e aminoacideve) |
| Vlera Ph | 7.6 (gama e aktivitetit 6-10) |
| Temperatura e përshtatshme | 60℃ (Diapazoni i aktivitetit 15-70℃) |
| Agjent aktivizues | Na2+.K+ |
| Frenues | Frenues i Rnase |
| Metoda e inaktivizimit | Nuk mund të çaktivizohet me ngrohje, sugjerohet përdorimi i kolonës centrifuguese |
| Origjina | Gjedhi |
| Tretshmëria | I tretshëm në ujë (10 mg/ml) |
| Humbje në të thatë | ≤5,0% |
| Aktiviteti i enzimës | ≥60 njësi Kunitz/mg |
| Pika izoelektrike | 9.6 |
Shënime
Për sigurinë dhe shëndetin tuaj, ju lutemi vishni pallto laboratori dhe doreza njëpërdorimshe për operim.
