Një hap RT-qPCR SYBR Premix jeshil
Numri i maceve: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix është për përcaktimin sasior të fluoreshencës bazuar në ngjyrën SYBR Green I.Duke përdorur primerë specifikë për gjen, reaksionet e transkriptimit të kundërt dhe qPCR përfundojnë në një tub, duke eliminuar nevojën për operacione të përsëritura të hapjes së kapakut dhe tubimit, duke përmirësuar ndjeshëm efikasitetin e analizës dhe duke reduktuar rrezikun e kontaminimit.Për mostrat e ARN-së, kompleti përdor transkriptazën e kundërt rezistente ndaj nxehtësisë për sintezën efikase të cDNA-së dhe HotStart Taq ADN Polimerazën për amplifikimin sasior.Nën sistemin e optimizuar të tamponit, ndjeshmëria e kompletit mund të jetë deri në 0,1 pg për objektivat me shprehje të lartë dhe deri në 1 pg për objektivat e shprehur mesatarisht.Kompleti është i përshtatshëm për amplifikimin dhe sasinë e mostrave të ADN-së.Ai mundëson zbulimin dhe përcaktimin e ndjeshëm të acideve nukleike nga mostra të ndryshme bimore dhe shtazore, qeliza dhe mikroorganizma.
Komponentët
| No | Emri | Vëllimi | Vëllimi |
| 1 | Buffer i avancuar | 250 μL | 2×1,25 mL |
| 2 | Përzierje e avancuar enzimash | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase pa H2O | 250 μL | 2×1,25 mL |
Kushtet e ruajtjes
Ky produkt duhet të ruhet në -25~-15℃ larg dritës për 1 vit.
Udhëzimet
1.Konfigurimi i sistemit të reagimitd
| Komponentët | Vëllimi (μL) | Vëllimi (μL) | Përqendrimi përfundimtar |
| Buffer i avancuar | 12.5 | 25 | 1× |
| Përzierje e avancuar enzimash | 1 | 2 | - |
| Primer përpara (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Primer i kundërt (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Tabela e ARN-sëb | X | X | - |
| RNase pa H2Oc | deri në 25 | deri në 50 | - |
Shënime:
1) a.Tpërqendrimi përfundimtar i primerit ishte 0.2 μmol/L, i cili gjithashtu mund të rregullohej midis 0.1 dhe 1 μmol/L sipas rastit.
2) b.Reagenti është jashtëzakonisht i ndjeshëm, me ARN totale në intervalin 1pg-1μg dhe testimi i mostrave njerëzore tregoi një hyrje optimale prej 1 pg-100 ng, duke kontrolluar një vlerë të përgjithshme Ct në intervalin 15-30 sipas rastit.
3) c.Rekomandohet përdorimi i 20 μL ose 50 μL për të siguruar vlefshmërinë dhe riprodhueshmërinë e amplifikimit të gjenit të synuar.
4) d.Ju lutemi përgatituni në stolin ultra të pastër dhe përdorni maja dhe tuba reagimi pa mbetje nukleaza;rekomandohen këshilla me fishekë filtri.Shmangni kontaminimin e kryqëzuar dhe kontaminimin me aerosol.
2.Programi i reagimit
| Hapi i ciklit | Temp. | Koha | Ciklet |
| Transkriptimi i kundërt | 50 ℃a | 6 min | 1 |
| Denatyrimi fillestar | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Reaksioni i përforcimit | 95 ℃ | 15 sek | 40 |
| 60 ℃b | 30 sek | ||
| Faza e kurbës së shkrirjes | Parazgjedhjet e instrumentit | 1 | |
Shënime:
1) a.Temperatura e transkriptimit të kundërt mund të zgjidhet ndërmjet 50-55°C sipas nevojave eksperimentale.Për mostrat e ADN-së, procesi i transkriptimit të kundërt mund të hiqet.
2) b.Në raste të veçanta, temperatura e pjekjes/zgjatjes mund të rregullohet sipas vlerës Tm të primerit, rekomandohet 60°C.
Shënime
1. Ky produkt është vetëm për përdorim kërkimor.
2. Ju lutemi veproni me veshje laboratori dhe doreza njëpërdorimshe, për sigurinë tuaj.
