Multiplex qPCR Probe Premix
Numri i maceve: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Bazuar në Ngjyrë) është një zgjidhje paraprake për amplifikimin sasior PCR 2 × në kohë reale, i karakterizuar nga ndjeshmëri dhe specifikë e lartë, e cila ka ngjyrë blu dhe ka efektin e shtimit të mostrës.Ky produkt është një reagent i parapërzier 2× Mix që mundëson deri në katër reaksione sasiore fluoreshente PCR në një pus të vetëm reaksioni.Ky produkt përmban metodën e modifikuar gjenetikisht të antitrupave për enzimën Taq me fillim të nxehtë, duke përmirësuar ndjeshëm ndjeshmërinë dhe specifikën e amplifikimit.Në të njëjtën kohë, ky produkt ka optimizuar thellësisht buferin me shumë reaksione, i cili mund të përmirësojë efikasitetin e amplifikimit të reaksionit dhe të promovojë amplifikimin efektiv të shablloneve me përqendrim të ulët.Ky produkt mund të përdoret për gjenotipizimin dhe analizën sasiore multiplekse.
Specifikim
| Fillimi i nxehtë | Nisja e nxehtë e integruar |
| Metoda e zbulimit | Zbulimi i sondës së primerit |
| Metoda PCR | qPCR |
| Polimeraza | Taq ADN polimeraza |
| Lloji i mostrës | ADN |
Kushtet e ruajtjes
Produkti dërgohet me akull të thatë dhe mund të ruhet në -25~-15℃ për 2 vjet.
Udhëzimet
1. ReagimiSistemi
| Komponentët | Vëllimi (μL) | Përqendrimi përfundimtar |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Përzierja e primerit (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Përzierja e sondës (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Bojë referimi Rox | 0.5 | 1× |
| Modeli i ADN/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | deri në 25 | - |
Shënime:Përziejini mirë para përdorimit për të shmangur flluska të tepërta nga lëkundjet e forta.
a.Përqendrimi i primerit: Primer Mix përmban çifte të shumta abetaresh, zakonisht secili primer me një përqendrim përfundimtar prej 0,2 μmol/L dhe gjithashtu mund të rregullohet ndërmjet 0,1 dhe 0,5 μmol/L sipas rastit.
b.Përqendrimi i sondës: Probe Mix përmban sonda të shumta me sinjale të ndryshme fluoreshence, dhe përqendrimi i secilës sondë mund të rregullohet midis 50 dhe 250 nmol/L sipas situatës specifike.
1.Referenca e bojës Rox: Përdoret në instrumentin e amplifikimit të PCR në kohë reale, siç është Applied Biosystems për të korrigjuar gabimin e sinjalit fluoreshent të krijuar midis puseve;ky produkt nuk përmban referencë të bojës Rox.Cas#10200 rekomandohet nëse është e nevojshme.
2.Hollimi i shabllonit: qPCR është shumë i ndjeshëm dhe rekomandohet hollimi i shabllonit për përdorim.Nëse shablloni është një zgjidhje stok ADN, vëllimi i shabllonit nuk duhet të kalojë 1/10 e vëllimit total.
3.Sistemi i reagimit: 25μL,30μL ose 50 μL rekomandohet për të siguruar efektivitetin dhe përsëritshmërinë e amplifikimit të gjenit të synuar.
4.Përgatitja e sistemit: Ju lutemi përgatituni në stolin super të pastër dhe përdorni majat dhe tubat e reagimit pa mbetje nukleaze;rekomandohet përdorimi i majave me fishekë filtri.Shmangni kontaminimin e kryqëzuar dhe kontaminimin me aerosol.
2.Programi i reagimit
| Hapi i ciklit | Temp. | Koha | Ciklet |
| Fillestar-denatyrim | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Denatyrimi | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Pjekja/Zgjatja | 60 ℃ | 30 sek |
Shënime:
1.Pjekja/Zgjatja: Temperatura dhe koha mund të rregullohen siç duhet sipas vlerës së projektuar të primerit Tm.
2.Përvetësimi i sinjalit të fluoreshencës: Koha e marrjes së sinjalit të fluoreshencës që kërkohet për instrumente të ndryshme të zbulimit qPCR është e ndryshme, ju lutemi vendosni sipas kufirit kohor minimal.Koha e disa instrumenteve të zakonshme caktohet si më poshtë:
20 sek: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek: Applied Biosystems 7300
32 sek: Applied Biosystems 7500
Shënime
Ju lutemi vishni PPE-të e nevojshme, të tilla pallto laboratori dhe doreza, për të garantuar shëndetin dhe sigurinë tuaj!
