RT-LAMP Master Mix Colormetric HCB5204A
Ky produkt përmban tampon reaksioni, përzierje RT-Enzimash (Bst ADN polimerazë dhe transkriptazë e kundërt rezistente ndaj nxehtësisë), Mbrojtës të liofilizuar dhe përbërës ngjyrash kromogjene.Për t'u përdorur, thjesht përdorni Buffer, enzima e reagimit dhe abetarja përzihen dhe shtohen në shabllon;Shtimi i mbrojtësit të liofilizuar mund të jetë i drejtë.U lidh me një liofilizues dhe u liofilizua, dhe vetëm abetaret dhe shabllonet u shtuan kur përdoreshin.Ky komplet siguron një zbulim të shpejtë dhe të qartë vizual të amplifikimit, i cili reagim negativ tregohet me të kuqe dhe reagimi pozitiv tregohet nga një ndryshim në të verdhë.
Komponenti
| Komponenti | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Bufer përforcues i ndërmjetësuar me lak (me bojë) | 0,96 ml | 4,80 mL×2 | 9,60 mL×10 |
| RT-Përzierja e enzimave | 270 μL | 2.70 ml | 2,70 mL×10 |
| Mbrojtës i liofilizuar | 0,96 mL×2 | 9,60 mL×2 | 9,60 mL×20 |
Aplikacionet
Për amplifikimin izotermik të ADN-së ose ARN-së.
Kushtet e ruajtjes
Transportohet me akull të thatë, i ruajtur në -25~ -15℃.Shmangni ngrirje-shkrirjen e shpeshtë, produkti është i vlefshëm për 12 muaj.
Protokolli
1.Shkrini puferin e reaksionit që do të përdoret në temperaturën e dhomës.Vidhosni shkurtimisht ose përmbysni tubat disa herë për t'u përzier plotësisht, më pas centrifugoni për të mbledhur lëngun në fund të tubit.
2.Përgatitja e sistemit të reagimit.Ky reagent mund të përgatitet në dy sisteme reaksioni, përzierje reaksioni të lëngët dhe përzierje të sistemit të liofilizuar.
1) Përgatitni përzierjen e reaksionit të lëngshëm
| Komponenti | Vëllimi |
| Bufer përforcues i ndërmjetësuar me lak (me bojë) | 10 μL |
| RT-Përzierja e enzimave | 2.8 μL |
| 10 × Përzierje Primera | 5 μL |
| Modelet e ADN/ARN-së b | × μL |
| Ujë pa bërthama | Deri në 50 μL |
2) Përzierja e sistemit të liofilizimit
① Përgatitni përzierjen e liofilizuar
| Komponenti | Vëllimi |
| Bufer përforcues i ndërmjetësuar me lak (me bojë) | 10 μL |
| Mbrojtës i liofilizuar | 20 μL |
| RT-Përzierja e enzimave | 2.8 μL |
| Ujë pa bërthama | Deri në 50 μL |
② Liofilizimi: Përzierja e përgatitur u liofilizua në një sistem 50μL
③ Përgatitni përzierjen e reagimit
| Komponenti | Vëllimi |
| Përzierje e liofilizuar | 1 copë |
| 10 × Përzierje Primera | 5 μL |
| Modelet e ADN/ARN-së b | × μL |
| Ujë pa bërthama | Deri në 50 μL |
Shënime:
1) a.10×Përzierja e primerit: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (i tretshëm në ujë) rekomandohet për templ të acidit nukleik.
1.Inkuboni në 65°C për 30-45 minuta, të cilat mund të zgjaten në mënyrë të përshtatshme sipas kohës së reagimit të ndryshimit të ngjyrës.
2.Sipas syrit të lirë, e verdha ishte pozitive dhe e kuqja ishte negative.
Shënime
1.Kripa mund të shfaqet në pjesën e poshtme të tubit tampon, të rrotullohet shkurtimisht ose të përmbyset tubat disa herë për t'u përzier plotësisht në temperaturën e dhomës.
2.Temperatura e reagimit mund të optimizohet midis 62 ℃ dhe 68 ℃ sipas gjendjes së abetareve.
3.Reagentët e paketuar nuk duhet të ekspozohen në ajër për një kohë të gjatë.
4.Reaksioni i zbardhjes së kuqe dhe të verdhë varet nga ndryshimi i pH-së së sistemit të reaksionit, ju lutemi mos përdorni tretësirën ruajtëse të acidit nukleik Tris, rekomandohet të përdorni ddH2O acidi nukleik i ruajtur;
5.Eksperimenti duhet të standardizohet, duke përfshirë përgatitjen e sistemit të reaksionit, liofilizimin dhe procesin e përpunimit të mostrës dhe shtimit të mostrës;
6.Për të shmangur kontaminimin, rekomandohet përgatitja e sistemit të reagimit në një stol ultra të pastër, në të tjera Shtoni shabllone në kapuçin e tymrave të dhomës për të shmangur ndërhyrjet false pozitive.
