Kompleti CHO HCP ELISA
Në këtë analizë përdoret një metodë imunosorbente ELISA me një hap.Mostrat që përmbajnë CHOK1 HCP reagojnë njëkohësisht me antitrupat anti-CHOK1 të dhisë të etiketuar me HRP dhe antitrupat anti-CHOK1 të veshura në pllakën ELISA, duke formuar më në fund një kompleks sanduiç të antitrupave të etiketuar me antitrupa të fazës së ngurtë-HCP.Antigjen-antitrupi i palidhur mund të hiqet duke larë pllakën ELISA.Substrati TMB shtohet në pus për reagim të mjaftueshëm.Zhvillimi i ngjyrës ndalet pas shtimit të tretësirës ndaluese dhe vlera e OD ose e absorbimit të tretësirës së reaksionit në 450/650 nm lexohet me një lexues mikropllake.Vlera e OD ose vlera e absorbimit është proporcionale me përmbajtjen e HCP në tretësirë.Nga kjo, përqendrimi i HCP në tretësirë mund të llogaritet sipas lakores standarde.
Aplikacion
Ky komplet përdoret për të zbuluar në mënyrë sasiore përmbajtjen e mbetjeve të proteinave të qelizave pritëse CHOK1 në mostra.
Ckomponentët
| S/N | Komponenti | Përqendrimi | Kushtet e ruajtjes |
| 1 | Standardi CHOK1 HCP | 0.5 mg/mL | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0.5 mg/mL | ≤–20℃, mbrojeni nga drita |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, mbrojeni nga drita |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Ndaloni zgjidhjen | NA | RT |
| 6 | Mbytës me mikropllakë | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Pllaka para-veshjeje me adsorbim të lartë | NA | 2-8 ℃ |
Pajisjet e nevojshme
| Materialet harxhuese / Pajisjet | Prodhimi | Katalogu |
| Lexues i mikropllakës | Pajisjet molekulare | Spectra Max M5, M5e ose ekuivalente |
| Termomikser | Eppendorf | Eppendorf/5355, ose ekuivalent |
| Përzierës Vortex | IKA | MS3 Digital, ose ekuivalent |
Magazinimi dhe stabiliteti
1.Transporti në -25~-15°C.
2.Kushtet e ruajtjes janë siç tregohen në Tabelën 1;komponentët 1-2 ruhen ≤–20°C, 5-6 ruhen RT,3,4, 7, 8 ruhen në 2-8℃;periudha e vlefshmërisë është 12 muaj.
Parametrat e produktit
1.Ndjeshmëria: 1ng/ml
2.Gama e zbulimit: 3- 100ng/mL
3.Saktësia: CV brenda analizës≤ 10%, CV ndër analizë≤ 15%
4.Mbulimi me HCP: >80%
5.Specifikimi: Ky komplet është universal pasi reagon në mënyrë specifike me CHOK1 HCP pavarësisht nga procesi i pastrimit.
Përgatitja e reagentit
1.PBST 0,05%
Merrni 15 ml 20×PBST 0,05%, të holluar në ddH2O, dhe deri në 300 ml.
2.1.0% BSA
Merrni 1 g BSA nga shishja dhe holloni në 100 ml PBST 0.05%, përzieni mirë derisa të treten plotësisht dhe ruajeni në 2-8°C.Buferi i përgatitur i hollimit është i vlefshëm për 7 ditë.Rekomandohet të përgatitet sipas nevojës.
3.Tretësirë zbuluese 2μg/mL
Merrni 48 μL 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP dhe holloni në 11,952 μL 1% BSA për të marrë një përqendrim përfundimtar prej 2 μg/mL tretësirë zbulimi.
4.QC dhe Përgatitja e Standardeve CHOK1 HCP
| Tub Nr. | Origjinale | Përqendrimi | Vëllimi | 1% BSA | Vëllimi total | Final |
| A | Standard | 0.5 mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabela: Përgatitja e QC dhe Standardeve
Procedura e analizës
1.Përgatitni reagentët siç tregohet në "Përgatitja e reagentit" më sipër.
2.Merrni 50 μL standarde, mostra dhe QC (referojuni Tabelës 3) në çdo pus, më pas shtoni 100 μL tretësirë të zbulimit (2 μg/mL);Mbulojeni pjatën me mbyllës dhe vendoseni pllakën ELISA në termomikser.Inkuboni në 500 rpm, 25±3℃ për 2 orë.
3.Përmbysni mikropllakën në lavaman dhe hidhni tretësirën e veshjes.Hidhni me pipetë 300 μL PBST 0,05% në çdo pus për të larë pllakën ELISA dhe hidhni tretësirën dhe përsëritni larjen 3 herë.Kthejeni pjatën në një peshqir letre të pastër dhe thajeni.
4.Shtoni 100 μL substrate TMB (shih tabelën 1) në çdo pus, mbyllni pllakën ELISA dhe inkuboni në errësirë në 25±3℃ për 15 minuta.
5.Hidhni me pipetë 100 μL tretësirë ndaluese në çdo pus.
6.Matni thithjen në gjatësinë e valës 450/650 nm me lexues mikropllakë.
7.Analizoni të dhënat me SoftMax ose softuer ekuivalent.Paraqitni lakoren standarde duke përdorur një model të regresionit logjistik me katër parametra.
Shembull i kurbës standarde
SHËNIM: Nëse përqendrimi i HCP në kampion tejkalon kufirin e sipërm të kurbës standarde, ai duhet të hollohet siç duhet me tampon hollimi përpara testimit.
SHËNIME
Tretësira ndaluese është acid sulfurik 2M, ju lutemi trajtojeni me kujdes për të shmangur spërkatjen!
