BspQI
BspQI mund të shprehet në mënyrë rikombinuese në E. coli që mund të njohë vende specifike dhe prodhohen nën
BspQI, një endonukleazë kufizuese e endonukleazës restriktive IIs, rrjedh nga një shtam rikombinant E. coli që mbart genin BspQI të klonuar dhe të modifikuar nga Bacillus sphaericus.Mund të njohë vende specifike, dhe sekuenca e njohjes dhe vendet e ndarjes janë si më poshtë:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Karakteristikat e produktit
1. Aktivitet i lartë, tretje e shpejtë;
2. Aktivitet i ulët i yjeve, duke siguruar prerje të saktë si "bisturi";
3. Pa BSA dhe pa origjinë shtazore;
Ndjeshmëria ndaj metilimit
Djam metilimi:Jo i ndjeshëm;
Dcm metilimi:Jo i ndjeshëm;
Metilimi CpG:Jo i ndjeshëm;
Kushtet e ruajtjes
Produkti duhet të dërgohet ≤ 0℃;Ruani në gjendje -25~- 15℃.
Buferi i ruajtjes
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 μg/ml Albuminë rekombinante, 0. 1% Trition X-100 dhe 50% glicerinë (pH 7.0 @ 25°C).
Përkufizimi i njësisë
Një njësi përcaktohet si sasia e enzimës që kërkohet për të tretur 1 µg të ADN-së së kontrollit të brendshëm në 1 orë në 50°C në një vëllim total reaksioni prej 50 µL.
Kontrolli i cilësisë
Analiza e pastërtisë së proteinave (SDS-PAGE):Pastërtia e BspQI ishte ≥95% e përcaktuar nga analiza SDS-PAGE.
RNase:10U BspQI me 1.6μg MS2 ARN për 4 orë në 50℃ nuk jep degradim siç përcaktohet nga elektroforeza e xhelit të agarozës.
Aktiviteti jo specifik i DNase:10U BspQI me 1μg λ ADN në 50℃ për 16 orë, krahasuar me 50℃ për 1 orë, nuk jep ADN të tepërt siç përcaktohet nga elektroforeza me xhel agarozë.
Lidhja dhe prerja:Pas tretjes së 1 μg λDNA me 10U BspQI, fragmentet e ADN-së mund të lidhen me T4 ADN ligazë në 16ºC.Dhe këto fragmente të lidhura mund të riprodhohen me BspQI.
E. coli ADN: Zbulimi qPCR i TaqMan rADN-specifik i E. coli 16s tregoi se mbetjet e gjenomit të E.coli ≤ 0.1 pg/ul.
Mbetjet e proteinave pritëse:≤ 50 ppm
Bakterike Endotoksina: Testi LAL, sipas botimit Kinez Farmakopeja IV 2020, metoda e testit të kufirit të xhelit, rregull i përgjithshëm (1143).Përmbajtja e endotoksinës bakteriale duhet të jetë ≤10 EU/mg.
Sistemi dhe kushtet e reagimit
| Komponenti | Vëllimi |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| ADN | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μL |
| dd H2O | Deri në 50 μL |
Kushtet e reagimit: 50℃, 1-16 orë.
Inaktivizimi i nxehtësisë: 80°C për 20 min.
Sistemi dhe kushtet e rekomanduara të reagimit mund të ofrojnë efekt relativisht të mirë të tretjes së enzimës, i cili është vetëm për referencë, ju lutemi referojuni rezultateve eksperimentale për detaje.
Aplikimi i produktit
Tretje e kufizimit të endonukleazës, Klonim i shpejtë.
Shënime
1. Vëllimi i enzimës ≤ 1/10 e vëllimit të reaksionit.
2. Aktiviteti i yllit mund të ndodhë kur përqendrimi i glicerinës është më shumë se 5%.
3. Aktiviteti i ndarjes mund të ndodhë kur Substrati është nën raportin e rekomanduar.
