Ultra nukleaza
UltraNuclease është një endonuklaez i gjeneruar gjenetikisht i përftuar nga Serratia marcescens, i cili është i aftë të degradojë ADN-në ose ARN-në, qofshin dyfishtë ose të vetme, lineare ose rrethore në një gamë të gjerë kushtesh, të degradojë plotësisht acidet nukleike në oligonukleotide 5'-monofosfate me gjatësi 33-5bazike. .Pas modifikimit të inxhinierisë gjenetike, produkti u fermentua, u shpreh dhe u pastrua në Escherichia coli (E. coli), e cila zvogëlon viskozitetin e kërkimit shkencor joshkencor të supernatantit të qelizave dhe lizatit qelizor, por gjithashtu përmirëson efikasitetin e pastrimit dhe kërkimin funksional të proteinave.Mund të përdoret gjithashtu në terapinë gjenetike, pastrimin e viruseve, prodhimin e vaksinave, proteinat dhe industrinë farmaceutike të polisaharideve si një reagent për heqjen e mbetjeve të acidit nukleik të bujtësit.
Karakteristikat e produktit
| CAS Nr. | 9025-65-4 |
| KE Nr. | |
| Peshë molekulare | 30 kDa |
| Pika Izoelektrike | 6.85 |
| Pastërtia e proteinave | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| Veprimtari specifike | ≥1.1×106 U/mg |
| Temperatura optimale | 37°C |
| PH optimale | 8.0 |
| Aktiviteti i Proteazës | negativ |
| Biobrëndë | ＜10 CFU/100,000 U |
| Proteina e mbetur e qelizave pritëse | ≤10 ppm |
| Metaleve të rënda | ≤10 ppm |
| Endotoksina bakteriale | ＜0,25EU/1000U |
| Buferi i ruajtjes | 20mM Tris-HCl, pH 8,0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl, 50% glicerinë |
Kushtet e ruajtjes
Transporti ≤0°C；-25~-15°C Magazinimi, vlefshmëria 2 vjeçare (shmangni ngrirjen-shkrirjen).
Përkufizimi i njësisë
Sasia e enzimës së përdorur për të ndryshuar vlerën e përthithjes së △A260 me 1,0 brenda 30 minutash në 37 °C, pH 8,0, ekuivalente me ADN-në e spermës së salmonit të tretur prej 37 μg duke prerë në oligonukleotide, u përcaktua si një njësi aktive (U).
Kontrolli i cilësisë
Proteina e mbetur e qelizave pritëse: Kompleti ELISA
•Proteaza Mbetjet: 250KU/mL UltraNukleaza reagoi me substrat për 60 minuta, nuk u zbulua asnjë aktivitet.
•Endotoksina bakteriale: LAL-Test, Farmakopeja e Republikës Popullore të Kinës Vëllimi 4 (Edicioni 2020) Metoda e testimit të kufirit të xhelit.Rregulla të përgjithshme (1143).
•Biobarra: Farmakopeja e Republikës Popullore të Kinës Vëllimi 4 (Botimi 2020) - Përgjithshme
Rregullat për Testin e Sterilitetit (1101), Standardi Kombëtar i PRC, GB 4789.2-2016.
•Metaleve të rënda:ICP-AES, HJ776-2015.
Operacioni
Aktiviteti i UltraNukleazës u frenua ndjeshëm kur përqendrimi i SDS ishte mbi 0.1% ose EDTA
përqendrimi ishte mbi 1 mM. Surfaktanti Triton X- 100, Tween 20 dhe Tween 80 nuk kishin asnjë efekt në nukleazën
vetitë kur përqendrimi ishte nën 1.5%.
| Operacioni | Operacioni optimal | Operacioni i vlefshëm |
| Temperatura | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100 mM | > 100 mm |
| 2-Merkaptoetanol | 0-100 mM | > 100 mm |
| Jon metalik monovalent (Na+, K+ etj.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Përdorimi dhe Dozimi
• Largoni acidin nukleik ekzogjen nga produktet e vaksinës, zvogëloni rrezikun e toksicitetit të acidit nukleik të mbetur dhe përmirësoni sigurinë e produktit.
• Ulni viskozitetin e lëngut ushqimor të shkaktuar nga acidi nukleik, shkurtoni kohën e përpunimit dhe rrisni rendimentin e proteinave.
• Hiqni acidin nukleik që ka mbështjellë grimcën (virusin, trupin e përfshirë, etj.), i cili është i favorshëm
për lirimin dhe pastrimin e grimcave.
| Lloji eksperimental | Prodhimi i proteinave | Virus, vaksinë | Droga qelizore |
| Numri i qelizave | 1 g peshë të lagësht qelize (ri pezulluar me 10 ml bufer) | 1L fermentim supernatanti i lëngshëm | Kultura 1L |
| Doza minimale | 250 U | 100 U | 100 U |
| Doza e rekomanduar | 2500 U | 25000 U | 5000U |
• Trajtimi me nukleazë mund të përmirësojë rezolucionin dhe rikuperimin e kampionit për kromatografinë e kolonës, elektroforezën dhe analizën e blotit.
• Në terapinë gjenetike, acidi nukleik hiqet për të marrë viruse të purifikuara të lidhura me adeno.
