Robustart Taq ADN Polimeraza

Robustart Taq ADN Polimeraza është një polimerazë e ADN-së me fillim të nxehtë.Ky produkt jo vetëm që mund të frenojë më mirë reaksionin jospecifik të shkaktuar nga pjekja jo specifike e primerëve ose grumbullimi i primerit në procesin e përgatitjes dhe amplifikimit të sistemit PCR.Prandaj, ka specifikë të shkëlqyeshme dhe është më efektiv për amplifikimin e shablloneve me përqendrim të ulët, dhe është i përshtatshëm për reaksionin e amplifikimit të shumëfishtë PCR.Për më tepër, ky produkt ka zbatueshmëri shumë të mirë dhe rezultate të qëndrueshme të amplifikimit mund të merren në lloje të ndryshme të reaksioneve PCR.

Komponentët

1.5 U/μL Robustart Taq ADN polimeraza

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ pa) (opsionale)

3.25 mM MgCl₂(opsionale)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ pa) nuk përmban dNTP dhe Mg²+, ju lutemi shtoni dNTPs dhe MgCl₂gjatë përgatitjes së sistemit të reaksionit.

Aplikacionet e rekomanduara

1.Përforcim i shpejtë.

2.Përforcim i shumëfishtë.

3.Amplifikimi i drejtpërdrejtë i gjakut, tamponëve dhe mostrave të tjera.

4.Zbulimi i sëmundjeve të frymëmarrjes.

Gjendja e ruajtjes

-20°C për ruajtje afatgjatë, duhet të përzihet mirë para përdorimit, të shmanget ngrirja-shkrirja e shpeshtë.

*Nëse reshjet ndodhin pas ftohjes, është normale;rekomandohet të ekuilibrohet në temperaturën e dhomës përpara përzierjes dhe përdorimit.

Përkufizimi i njësisë

Një njësi aktive (U) përcaktohet si sasia e enzimës që përfshin 10 nmol deoksiribonukleotidi në materialin e patretshëm në acid në 74°C për 30 minuta duke përdorur ADN-në e spermës së salmonit të aktivizuar si shabllon/primer.

Kontrolli i cilësisë

1.Pastërtia elektroforetike SDS-PAGE më e madhe se 98%.

2.Ndjeshmëria e amplifikimit, kontrolli nga grupi në grup, stabiliteti.

3.Nuk ka aktivitet ekzogjen nukleaza, nuk ka endonukleazë ekzogjene ose kontaminim ekzonukleazë

Udhëzimet

Konfigurimi i reagimit

Shënime:

1) a.Buferi nuk përmban dNTP dhe Mg²+, ju lutemi shtoni dNTP dhe MgCl₂gjatë përgatitjes së sistemit të reaksionit.

2) b.Nëse përdoret për qPCR/qRT-PCR, sondat fluoreshente duhet të shtohen në sistemin e reagimit.Zakonisht, një përqendrim përfundimtar i primerit prej 0.2 μM do të japë rezultate të mira;nëse performanca e reaksionit është e dobët, përqendrimi i primerit mund të rregullohet në intervalin 0,2-1 μM.Përqendrimi i sondës zakonisht optimizohet në intervalin 0,1-0,3 μM.Eksperimentet e gradientit të përqendrimit mund të kryhen për të gjetur kombinimin më të mirë të primerit dhe sondës.

Protokolli i ciklit termik

Shënime

1.Shpejtësia e amplifikimit të polimerazës së shpejtë të ADN-së nuk duhet të jetë më e vogël se 1 kb/10 s.Shpejtësia e rritjes dhe rënies së temperaturës, mënyra e kontrollit të temperaturës dhe efikasiteti i përcjelljes së nxehtësisë të instrumenteve të ndryshëm PCR ndryshojnë shumë, prandaj rekomandohet të optimizohen kushtet optimale të reagimit për instrumentin specifik të shpejtë PCR.

2.Sistemi është shumë i adaptueshëm, me specifikë dhe ndjeshmëri më të lartë.

3.I përshtatshëm për t'u përdorur si reagentë për zbulimin e PCR me ndjeshmëri të lartë dhe mund të përdoret në reaksionet e amplifikimit të PCR multipleks.

4.5'→3' aktivitet polimerazë, 5'→3' aktivitet ekzonukleazë;nuk ka aktivitet 3'→5' ekzonukleazë;nuk ka funksion korrigjues.

5.I përshtatshëm për testimin cilësor dhe sasior të PCR dhe RT-PCR.

6.Fundi 3' i produktit PCR është A, i cili mund të klonohet drejtpërdrejt në një vektor T.

7.Metoda me tre hapa rekomandohet për primerët me temperatura të ulëta pjekjeje ose për amplifikimin e fragmenteve më të gjata se 200 bp.