DNase I
DNaza I (Deoksiribonukleaza I) është një endodeoksiribonukleazë që mund të tretet ADN-ja me një ose dy fije floku.Ai njeh dhe këput lidhjet fosfodiesterike për të prodhuar monodeoksinukleotide ose oligodeoksinukleotide të vetme ose të dyfishta me grupe fosfate në terminalin 5' dhe hidroksil në terminalin 3'.Aktiviteti i DNazës I varet nga Ca2+ dhe mund të aktivizohet nga jonet metalike dyvalente si Mn2+ dhe Zn2+.5mM Ca2+ mbron enzimën nga hidroliza.Në prani të Mg2+, enzima mund të njohë rastësisht dhe të çajë çdo vend në çdo varg të ADN-së.Në prani të Mn2+, vargjet e dyfishta të ADN-së mund të njihen njëkohësisht dhe të ndahen pothuajse në të njëjtin vend për të formuar fragmente të ADN-së me fund të sheshtë ose fragmente të ADN-së ngjitëse fundore me 1-2 nukleotide të dala.
Vetia e produktit
DNaza I i pankreasit të gjedhit u shpreh në sistemin e shprehjes së majave dhe u pastrua.
Ckomponentët
| Komponenti | Vëllimi | |||
| 0.1 KU | 1KU | 5KU | 50 KU | |
| DNase I, pa RNase | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5×10 ml |
Transporti dhe Magazinimi
1. Stabiliteti i ruajtjes: – 15℃~-25℃ për ruajtje;
2. Stabiliteti i Transportit: Transporti nën pako akulli;
3. Furnizohet në: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glicerinë, pH 7.6 në 25℃.
Përkufizimi i njësisë
Një njësi përcaktohet si sasia e enzimës që do të degradojë plotësisht 1 μg të ADN-së pBR322 në 10 minuta në 37°C.
Kontrolli i cilësisë
RNase:5U e DNase I me 1,6 μg MS2 ARN për 4 orë në 37 ℃ nuk jep degradim siç përcaktohet nga elektroforeza e xhelit të agarozës.
Bakterike Endotoksina:Testi LAL, sipas botimit Kinez Farmakopeja IV 2020, metoda e testit të kufirit të xhelit, rregull i përgjithshëm (1143).Përmbajtja e endotoksinës bakteriale duhet të jetë ≤10 EU/mg.
Udhëzime për përdorim
1. Përgatitni tretësirën e reaksionit në tubin pa RNase sipas përmasave të renditura më poshtë:
| Komponenti | Vëllimi |
| ARN | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, pa RNase (5U/μL) | 1 U për μg ARN |
| ddH2O | Deri në 10 μL |
2,37 ℃ për 15 minuta;
3.Shtoni tamponin e përfundimit për të ndaluar reaksionin dhe ngroheni në 65℃ për 10 minuta për të çaktivizuar DNazën I. Mostra mund të përdoret drejtpërdrejt për eksperimentin tjetër të transkriptimit.
Shënime
1.Përdor 1U DNase I për μg ARN ose 1U DNase I për më pak se 1μg ARN.
2.EDTA duhet të shtohet në një përqendrim përfundimtar prej 5 mM për të mbrojtur ARN-në nga degradimi gjatë inaktivizimit të enzimës.
